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用标记的二抗。
试剂准备,也就是让蛋白质跑的跑道,需要聚丙烯酰胺凝胶电泳来提供。
“配好胶,不合格的坚决不用,不要铤而走险。”
方子业仔细想了一下原理,如此给洛听竹解释。
说完,她偏头看向方子业的成片,条带清晰、没有杂带、背景干净!
因此定量检测hk2的含量,在骨巨细胞瘤经过过表达、沉默后的绝对数量,是检测hk2在骨巨细胞瘤展过程中作用的一个定量证据。
洛听竹欣然答应,灵动得如同一只勤劳的小松鼠。
方子业点了点头,加快了脚步。
然后是参赛的运动员,是把肿瘤细胞裂解之后,使得内部的蛋白质充分释放,然后制作了标准曲线。
做实验、搞钱、文章、学识点,充实且快乐。
“这张照片拍得怎么样?”
洛听竹拍完后,问方子业。
“蛋白含量高的话,可能是前期的文献准备没有确定好,我认为最有可能的是因为一抗浓度太高,作用时间太长引起。”
原理听起来颇为复杂,但其实真正要操作的时候,主要的步骤主要是以下几步。
经过page分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分……
而方子业此时,看着学识点飞跳动到了134,一下子增加了足足七十点的学识点,也是知道啊,这一次的B实验,在这一个课题之中的作用占比不小,可能是支撑整个课题规模的小骨架了。
“好,B好好跑。”
袁威宏交待,仿佛是在给方子业暗示,方子业在做什么,他都了然于心。
最后呈现出结果后,洛听竹欣喜异常:“方师兄,你今天这个条带显示很清楚欸,上一次范师兄跑出来的是哑铃状的。”
众所周知,糖酵解是糖转化为能量的第一步,没有糖酵解的第一步,葡萄糖和果糖想要被正常利用,是几乎不可能的事情,而如果依靠酮体等旁路作为有氧氧化的底材,肯定无济于事。
制作标准曲线之后,就可以让自己处理的细胞产生的‘运动员’开始上赛道了。
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